Антибиотики применяются только по назначению врача. Не занимайтесь самолечением!

Чувствительность к антибиотикам микроорганизмов


Методы изучения антибиотикочувствительности

Критерием чувствительности микроорганизмов к антибиотикам является минимальная концентрация антибиотика, ингибирующая (задерживающая) рост возбудителя при стандартных условиях постановки опыта. При определении лекарственной устойчивости используют чистую культуру возбудителя, выделенную до начала лечения антибиотиками, т. к. под их воздействием рост микроорганизмов полностью угнетен. Изучение чувствительности проводят методом диффузии в агар с применением стандартных дисков или методом серийных разведений в жидких и плотных питательных средах.

Метод бумажных дисков

Исследуемую бактериальную культуру засевают газоном на питательный агар в чашке Петри.

На засеянную поверхность пинцетом помещают на одинаковом расстоянии друг от друга бумажные диски, содержащие определенные дозы разных антибиотиков. Посев инкубируют при 37° С до следующего дня. По диаметру зон задержки роста исследуемой культуры бактерий судят о ее чувствительности к антибиотикам.

Для получения достоверных результатов необходимо применять стандартные диски и питательные среды, для контроля которых используются эталонные штаммы соответствующих микроорганизмов.

Метод дисков не дает надежных данных при определении чувствительности микроорганизмов к плохо диффундирующим в агар полипептидным антибиотикам (например, полимиксин, ристомицин). Если эти антибиотики предполагается использовать для лечения, рекомендуется определять чувствительность методом серийных разведений.

Метод серийных разведений

Данным методом определяют минимальную концентрацию (МИК) антибиотика, ингибирующую рост исследуемой культуры бактерий. Вначале готовят основной раствор, содержащий определенную концентрацию антибиотика (мкг/мл или ЕД/мл) в специальном растворителе или буферном растворе. Из него готовят все последующие разведения в бульоне (в объеме 1 мл), после чего к каждому разведению добавляют 0,1 мл исследуемой бактериальной суспензии, содержащие 106-107 бактериальных клеток в 1 мл. В последнюю пробирку вносят 1 мл бульона и 0,1 мл суспензии бактерий (контроль культуры). Посевы инкубируют при 37° С до следующего дня, после чего отмечают результаты опыта по помутнению питательной среды, сравнивая с контролем культуры. Последняя пробирка с прозрачной питательной средой указывает на задержку роста исследуемой культуры бактерий под влиянием содержащейся в ней минимальной ингибирующей концентрации антибиотика.

Номер пробирки

Разведение антибиотика

концентрация антибиотика, мкг/мл

Исследуемая культура, мл

рост бактерий (помутнение среды)

1

1:100

100

0,1

-

2

1:200

50

0,1

-

3

1:400

25

0,1

-

4

1:800

12,5

0,1

-

5

1:1600

6,25

0,1

+

6

1:3200

3,12

0,1

+

7

1 мл бульона без антибиотика

0,1

+ (контроль)

Оценку результатов определения чувствительности микроорганизмов к антибиотикам проводят по таблице, которая содержит пограничные значения диаметров зон задержки роста для устойчивых, умеренно устойчивых и чувствительных штаммов, а также значения МИК антибиотиков для устойчивых и чувствительных штаммов.

К чувствительным относятся штаммы микроорганизмов, рост которых подавляется при концентрациях препарата, обнаруживаемых в сыворотке крови больного при использовании обычных доз антибиотиков. К умеренно устойчивым относятся штаммы, для подавления роста которых требуются концентрации создающиеся в сыворотке крови при введении максимальных доз препарата Устойчивыми являются микроорганизмы, рост которых не подавляется препаратом в концентрациях, создаваемых в организме при использовании максимально допустимых доз.

studfiles.net

Микробиология - Определение чувствительности микробов к антибиотикам

Культуры микроорганизмов, выделенные у больных, в настоящее время обязательно проверяют на чувствительность к антибиотикам, используемым для лечения. Это позволяет более рационально проводить антибиотикотерапию. Проверка чувствительности микробов к антибиотикам тем более необходима, что в последние годы появились штаммы микроорганизмов, устойчивые к различным антибиотикам.

Для определения чувствительности микробов к антибиотикам существуют различные методы, среди которых наиболее распространены методы диффузии в агар (метод дисков) и метод последовательных разведений в жидкой или плотной питательной среде.

Метод диффузии в агар, или метод дисков. Испытуемую культуру засевают сплошным газоном на поверхность чашки Петри с мясопептонным агаром. Затем на поверхность агара помещают диски, пропитанные растворами антибиотиков (рис. 26).

Диски готовят из специального картона диаметром 6 мм. Содержание антибиотика в диске указывается на этикетке и соответствует рекомендации Всемирной организации здравоохранения (ВОЗ). Действие антибиотиков оценивают по феномену задержки роста вокруг диска после инкубации в термостате при 37°С в течение 18—24 ч. В зависимости от диаметра зоны задержки роста различают степень чувствительности испытуемого штамма: чувствительные (более 10 мм), малочувствительные (менее 10 мм) и устойчивые (отсутствие зоны). Вместо дисков при определении чувствительности микробов можно использовать цилиндрики (фарфоровые или металлические), куда заливают растворы антибиотика разной концентрации.

Метод последовательных разведений антибиотиков. Готовят серию двукратных разведений антибиотика в жидкой или плотной питательной среде, а затем в пробирки или на поверхность чашек Петри с каждым из разведений засевают испытуемую культуру микробов. После инкубации в термостате определяют минимальную подавляющую концентрацию антибиотика (МПК) по отсутствию роста в пробирке или на чашке с одним из разведений.

microbiology.ucoz.org

Методы изучения антибиотикочувствительности

Метод бумажных дисков (диско-дуффузионный)

Методика.Бактериальную культуру засевают газоном на питательный агар в чашку Петри.

На засеянную поверхность пинцетом помещают на одинаковом расстоянии друг от друга бумажные диски, содержащие определенные дозы разных антибиотиков. Посев инкубируют при 37°С до следующего дня. По диаметру зон задержки роста бактерий определяют ее чувствительность к антибиотикам.

Для получения достоверных результатов необходимо применять стандартные диски и питательные среды, для контроля которых используются эталонные штаммы соответствующих микроорганизмов.

Метод дисков не дает надежных данных при определении чувствительности микроорганизмов к плохо диффундирующим в агар полипептидным антибиотикам (например, полимиксин, ристомицин). Если эти антибиотики предполагается использовать для лечения, рекомендуется определять чувствительность методом серийных разведений.

Оценка результатов определения чувствительности микроорганизмов к антибиотикам методами дисков и серийных разведений

Антибиотик

Метод дисков: диаметры зон задержки роста на среде АГВ (агар Гурьева-Васильева)

Метод серийных разведений: минимальная ингибирующая концентрация мкг/мл

Устойчивые

Умеренно устойчивые

Чувстви-

тельные

Устойчивые

Чувстви-

тельные

Бензилпенициллин

≤ 20

21-28

≥ 29

-

≤ 0.1

Ампициллин

≤ 20

21-28

≥ 29

-

≤ 0.2

Карбенициллин

≤ 14

15-18

≥ 19

≥ 32

≤ 16

Метициллин

≤ 13

14-18

≥ 19

-

≤ 3

Оксациллин

≤ 15

16-19

≥ 20

-

≤ 3

Цефалексин

-

-

-

≥ 32

≤ 10

Цефалотин

≤ 14

15-18

≥ 19

≥ 32

≤ 10

Стрептомицин

≤ 16

17-19

≥ 20

≥ 15

≤ 6

Неомицин

≤ 12

13-16

≥ 17

-

≤ 10

Канамицин

≤ 14

15-18

≥ 19

≥ 25

≤ 6

Мономицин

≤ 13

14-17

≥ 18

-

≤ 10

Гентамицин

≤15

≥ 16

≥ 6

≤ 4

Тетрациклин

≤ 16

17-20

≥ 22

≥ 12

≤ 2

Эритромицин

≤ 17

18-21

≥ 22

≥ 8

≤ 2

Линкомицин

≤ 19

20-23

≥ 24

≥ 8

≤ 2

Левомицетин

≤ 15

16-18

≥ 19

≥ 16

≤ 8

Рифампицин

≤ 12

13-15

≥ 16

≥ 8

≤ 2

Полимиксин

≤ 11

12-14

≥ 15

≥ 50 Ед/мл

-

Ристомицин

≤ 9

10-11

≥ 12

-

≤ 5

Метод серийных разведений

б) определить минимально-подавляющую концентрацию антибиотиков по отношению к культуре золотистого стафилококка (St. aureus). Выбрать антибиотик для лечения.

Гентамицин к.к. к. а/б к.б.

Разведения антибиотика

25 12,5 6,25 3,125 1,56 0,78 0,39

Результат:_________________________________________________________________

Ампициллин к.к. к. а/б к.б.

Разведения антибиотика

25 12,5 6,25 3,125 1,56 0,78 0,39

Результат:_________________________________________________________________

Вывод: ___________________________________________________________________

__________________________________________________________________________

__________________________________________________________________________

Теоретическая справка

Метод серийных разведений

Данным методом определяют минимальную ингибирующую концентрацию (МИК) антибиотика рост исследуемой культуры бактерий.

Методика. Готовят основнойраствор, содержащий определенную концентрацию антибиотика (мкг/мл илиЕД/мл) в специальном растворителе или буферном растворе. Из него готовят последующие разведения в бульоне (в объеме 1 мл), после чего к каждомуразведению добавляют 0,1 мл исследуемой бактериальной суспензии, содержащей 106-107 бактериальных клеток в 1 мл. В последнюю пробирку вносят 1 мл бульонаи 0,1 мл суспензии бактерий (контроль культуры). Посевы инкубируют при 37°С до следующего дня, после чего отмечают результаты опыта по помутнениюпитательной среды, сравнивая с контролем культуры. Последняя пробирка спрозрачной питательной средой указывает на задержку роста исследуемой культуры бактерий, под влиянием содержащейся в ней минимальной ингибирующей концентрации антибиотика.

Номер пробирки

Разведение антибиотика

концентрация антибиотика, мкг/мл

Исследуемая культура, мл

рост бактерий (помутнение среды)

1

1:100

100

0,1

-

2

1:200

50

0,1

-

3

1:400

25

0,1

-

4

1:800

12,5

0,1

-

5

1:1600

6,25

0,1

+

6

1:3200

3,12

0,1

+

7

1 мл бульона без антибиотика

0,1

+ (контроль)

Оценку результатов определения чувствительности микроорганизмов к антибиотикам проводят по таблице, которая содержит значения МИК антибиотиков для устойчивых и чувствительных штаммов.

Кчувствительным относятся штаммы микроорганизмов, рост которых подавляется при концентрациях препарата, обнаруживаемых в сыворотке крови больного при использовании обычных доз антибиотиков. К умеренно устойчивым относятся штаммы, для подавления роста которых требуются концентрации,создающиеся в сыворотке крови при введении максимальных доз препарата Устойчивыми являются микроорганизмы, рост которых не подавляется препаратом в концентрациях, создаваемых в организме при использовании максимально допустимых доз.

в) классифицировать антибиотики.

Название антибиотика

Классифика-ционное положение

Действующее начало

Получение

Применение

Способ применения

Работа № 4. Методы изучения бактериальных вирусов (фагов)

Цель работы:изучить методы применения в практической медицине диагностических и лечебно-профилактических бактериофагов.

Самостоятельная работа:

а)учесть результат опыта по определению родовой принадлежности исследуемой культуры, выделенной от больного с кишечной инфекцией с помощью диагностических бактериофагов.

Метод Отто («стекающей капли»)

Результат:___________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________

Вывод:______________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________

б)определить источник инфекции у пациента с гнойным осложнением раныв хирургическом отделении.

Фаготипирование бактерий

П О С Е В Ы

стафилококка от стафилококка отстафилококкаот

пациента мед.работника 1 мед. работника 2

Результат:___________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________

Вывод:______________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________

Теоретическая справка

Диагностические и лечебно-профилактические бактериофаги

Применяемые на практике препараты бактериофагов представляют собой фильтрат бульонной культуры соответствующих микробов, лизированных фагом, содержащий живые частицы фага, а также растворённые антигены бактерий, освободившиеся из бактериальных клеток при их лизисе. Полученный препарат - жидкий бактериофаг должен иметь вид совершенно прозрачной жидкости жёлтого цвета большей или меньшей интенсивности.

Для применения с лечебно-профилактическими целями фаги могут выпускаться в форме таблеток с кислотоустойчивой оболочкой. Таблетированный сухой фаг более стабилен при хранении и удобен при применении. Одна таблетка сухого бактериофага соответствует 20-25 мл жидкого препарата. Срок годности сухого и жидкого препарата - 1 год. Жидкий бактериофаг следует хранить при температуре + 2 +10 С, сухой- не выше +1°С, но его можно хранить в холодильнике и при отрицательной температуре.

Принятый внутрь бактериофаг сохраняется в организме в течение 5-7 дней. Как правило, прием бактериофага не сопровождается какими-либо реакциями или осложнениями. Противопоказаний к приёму нет. Применяются в виде орошений, полосканий, примочек, тампонов, инъекций, а также вводят в полости - брюшную, плевральную, суставную и в мочевой пузырь, в зависимости от места локализации возбудителя.

Диагностические фаги выпускаются как в жидкой, так и сухой форме в ампулах.Перед началом работы сухой бактериофаг разводится. Если на ампулах указан титр,тр, ДРТ (доза рабочего титра) применяют в реакции фаголизабельности (метод Отто) для идентификации бактерий, если указан тип фага, то для фаготипирования– определения источника инфекции.

Действие бактериофага на микробную культуру в жидкой среде и на плотной среде

Метод Отто (стекающая капля)

Делают густой посев газоном исследуемой культуры. Через 5-10 мин после посева на подсушенную поверхность питательной среды наносят жидкий диагностический фаг. Чашку слегка наклоняют, чтобы капля фага растеклась по поверхности агара. Чашку помещают в термостат на 18-24 часа. Учёт результата производят по полному отсутствию роста культуры в месте нанесения капли фага.

Опыт на жидкой питательной среде

Делают посев исследуемой культуры в две пробирки с жидкой средой. В одну пробирку («О») добавляют петлёй диагностический бактериофаг. Через 18-20 часов в пробирке, куда бактериофаг не добавлялся («К»), наблюдается сильное помутнение бульона — произошел рост посеянной культуры. Бульон в пробирке, куда был добавлен бактериофаг, остался прозрачным вследствие лизиса культуры под его влиянием.

Фаготипирование бактерий

По спектру действия различают следующие бактериофаги: поливалентные, лизирующие родственные виды бактерий; моновалентные, лизирующие бактерии определенного вида; типовые, лизирующие отдельные типы (варианты) бактерий.

Например, один штамм патогенного стафилококка может лизироваться несколькими типами фагов, поэтому все типовые фаги (24) и штаммы патогенных стафилококков объединены в 4 группы.

Метод фаготипирования имеет большое значение для эпидемиологического исследования, так как позволяет выявить источник и пути распространения возбудителей заболеваний. С этой целью определяют фаговар выделенной из патологического материала чистой культуры на плотных питательных средах с помощью типовых диагностических фагов.

Фаговар культуры микроорганизмов определяют по тому типовому фагу, который вызвал ее лизис.Выделение бактерий одного фаговара от разных обследуемых указывает на источник заражения.

Схема описания бактериофагов:

Название препарата…………………

Классификационное положение: бактериофаг

Действующее начало: бактериофаг

Получение: фильтрат фаголизата бульонной культуры соответствующего микроорганизма

Применение:

лечебно-профилактические - для лечения и профилактики соответствующих инфекций;

диагностические - для идентификации микроорганизмов; определения источника инфекции

Способ применения:в зависимости от назначения фага

в) классифицировать бактериофаги.

Название бактериофага

Классифика-ционное положение

Действующее начало

Получение

Применение

Способ применения

Подпись преподавателя_________________________________________________________

САМОСТОЯТЕЛЬНАЯ РАБОТА ВО ВНЕУРОЧНОЕ ВРЕМЯ

Классифицируйте препараты (см. теоретическую справку):

Лактобактерин

Классификационное положение___________________

Действующее начало_____________________________

Получение_____________________________________

Применение_____________________________________

Способ применения______________________________

Линекс

Классификационное положение___________________

Действующее начало_____________________________

Получение_____________________________________

Применение_____________________________________

Способ применения______________________________

Бифиформ

Классификационное положение___________________

Действующее начало_____________________________

Получение_____________________________________

Применение_____________________________________

Способ применения______________________________

Карбенициллин

Классификационное положение____________________

Действующее начало_____________________________

Получение_____________________________________

Применение_____________________________________

Способ применения______________________________

Цефотаксим

Классификационное положение___________________

Действующее начало_____________________________

Получение_____________________________________

Применение_____________________________________

Способ применения______________________________

Мазь тетрациклиновая

Классификационное положение____________________

Действующее начало_____________________________

Получение_____________________________________

Применение_____________________________________

Способ применения______________________________

Таблетированный левомицетин

Классификационное положение___________________

Действующее начало_____________________________

Получение_____________________________________

Применение_____________________________________

Способ применения______________________________

Диски с полимиксином

Классификационное положение____________________

Действующее начало_____________________________

Получение_____________________________________

Применение_____________________________________

Способ применения______________________________

Рифампицин

Классификационное положение___________________

Действующее начало_____________________________

Получение_____________________________________

Применение_____________________________________

Способ применения______________________________

Коли-бактериофаг

Классификационное положение___________________

Действующее начало_____________________________

Получение_____________________________________

Применение_____________________________________

Способ применения______________________________

Брюшнотифозный бактериофаг в таблетках

Классификационное положение____________________

Действующее начало_____________________________

Получение_____________________________________

Применение_____________________________________

Способ применения______________________________

Холерный классический бактериофаг ДРТ 10-3

Классификационное положение____________________

Действующее начало_____________________________

Получение_____________________________________

Применение_____________________________________

Способ применения______________________________

ЗАНЯТИЕ 1.2.4 Дата________________

Нормальная микрофлора организма человека

Цель занятия:

1.Изучить качественный и количественный состав микрофлоры организма человека.

2.Функции нормальной микрофлоры.

3. Причины и условия формирования дисбактериозов.

4. Коррекция дисбактериозов.

Студент должен знать:

1. Качественный и количественный составнормальной микрофлоры организма человека, ее

функции.

2. Факторы, оказывающие влияние на количественный и качественный состав нормальной

микрофлоры организма человека.

3. Методы изучения качественного и количественного состава нормальной микрофлоры, критерии

оценки.

4.Причины и условия возникновения дисбактериозов, их коррекция.

Студент должен уметь:

  • проводить взятие материала для исследования микрофлоры организма человека;

  • проводить оценку качественного и количественного состава микрофлоры.

Студент должен иметь представление:

об особенностях взаимоотношений между отдельными микроорганизмами в различных биотопах организма человека (синергизм, антагонизм и др.).

Работа № 1. Микрофлора кожи

Цель: изучить микрофлору кожи.

Самостоятельная работа: оценить результаты посевов с кожи рук методом отпечатков на МПА и средуЭндо. Зарисовать, описать. Сделать вывод.

а)Среда МПА

Описать культуральные свойства колоний, выросших на МПА. Результаты внести в таблицу.

Тесты

Колонии

№ 1 № 2

Размер

Форма

Характер края

Поверхность

Цвет

Структура

Прозрачность

Вязкость

- из описанных колоний приготовить мазки, окрасить по Граму. Зарисовать.

№ 1

№2

Результат:___________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________

б)Среда Эндо

- изучить посевы на среде Эндо с целью выявления кишечной палочки (lac+ колонии).Из лактозопозитивных колоний сделать мазки, окрасить по Граму. Отметить наличие или отсутствие фекального загрязнения.

Результат:______________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________

Вывод_________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________________

Теоретическая справка

www.studfiles.ru

Методы определения чувствительности бактерий к антибиотикам

Некоторые возбудители инфекционных заболеваний со временем открытия антибиотиков мало изменили характер первоначальной чувствительности к этим препаратам (стрептококки группы А, пневмококки, менингококки, бруцеллы, некоторые сальмонеллы). Вместе с тем, большинство патогенных микробов со временем приобрело устойчивость к широко, подчас неконтролируемо и необоснованно применяемым противомикробным средствам. Наибольшее значение проблема устойчивости микроорганизмов имеет в отношении стафилококков, шигелл, эшерихий, протея, среди которых антибиотикоустойчивые штаммы выделяются с наибольшей частотой. По степени чувствительности к основным антибиотикам микробы подразделяются на чувствительные, умеренно чувствительные и устойчивые. В группу чувствительных входит большинство штаммов микроорганизмов, рост которых на питательных средах прекращается при использовании концентраций, соответствующих средним терапевтическим дозам антибиотиков. Если он угнетается при применении только максимальных доз препаратов, то такие микроорганизмы умеренно чувствительны к антибиотику. Если подавление роста достигается в опыте в лаборатории лишь при очень высоких концентрациях препарата, которые нельзя создать в организме, то такие возбудители инфекции относятся к устойчивым к антибиотику. Для определения чувствительности микробов к антибиотикам существует ряд методов: метод последовательных разведений в жидкой питательной среде или питательном агаре, метод диффузии в агар (метод дисков, насыщенных антибиотиками) и ускоренные методы. Метод дисков прост, широко используется, но дает лишь качественный ответ. Более надежным и точным количественным методом является метод последовательных разведений антибиотиков в питательной среде в стандартных условиях опыта. В большинстве случаев корреляция данных лабораторных исследований с клиническими бывает достаточно полной, а терапия - эффективной при изучении в динамике не только клинического течения процесса, но и возможной смены возбудителя или его чувствительности к антибиотикам.

Концентрация антибиотиков в тканях и жидкостях организма, как и их антимикробная активность, относятся к основным параметрам, определяющим эффективность антибиотикотерапии. При ее изучении наиболее широко применяют микробиологические методы исследования, основанные на способности антибиотика задерживать рост тест-микроба.

Для определения чувствительности бактерий к антибиотикам (антибиотикограммы) обычно применяют:

  • Метод диффузии в агар. На агаризованную питательную среду засевают исследуемый микроб, а затем вносят антибиотики. Обычно препараты вносят или в специальные лунки в агаре, или на поверхности посева раскладывают диски с антибиотиками («метод дисков»). Учет результатов проводят через сутки по наличию или отсутствию роста микробов вокруг лунок (дисков).

  • Метод дисков — качественный и позволяет оценить, чувствителен или устойчив микроб к препарату.

  • Методы определения минимальных ингибирующих и бактерицидных концентраций, т. е. минимального уровня антибиотика, который позволяет in vitro предотвратить видимый рост микробов в питательной среде или полностью ее стерилизует. Это количественные методы, которые позволяют рассчитать дозу препарата, так как концентрация антибиотика в крови должна быть значительно выше минимальной ингибирующей концентрации для возбудителя инфекции. Введение адекватных доз препарата необходимо для эффективного лечения и профилактики формирования устойчивых микробов.

Есть ускоренные способы, с применением автоматических анализаторов.

Определение чувствительности бактерий к антибиотикам методом дисков. Исследуемую бактериальную культуру засевают газоном на питательный агар или среду АГВ в чашке Петри.

Среда АГВ: сухой питательный рыбный бульон, агар-агар, натрий фосфат двузамещенный. Среду готовят из сухого порошка в соответствии с инструкцией.

На засеянную поверхность пинцетом помещают на одинаковом расстоянии друг от друга бумажные диски, содержащие определенные дозы разных антибиотиков. Посевы инкубируют при 37 °С до следующего дня. По диаметру зон задержки роста исследуемой культуры бактерий судят о ее чувствительности к антибиотикам.

Для получения достоверных результатов необходимо применять стандартные диски и питательные среды, для контроля которых используются эталонные штаммы соответствующих микроорганизмов. Метод дисков не дает надежных данных при определении чувствительности микроорганизмов к плохо диффундирующим в агар полипептидным антибиотикам (например, полимиксин, ристомицин). Если эти антибиотики предполагается использовать для лечения, рекомендуется определять чувствительность микроорганизмов методом серийных разведений.

Определение чувствительности бактерий к антибиотикам методом серийных разведений. Данным методом определяют минимальную концентрацию антибиотика, ингибирующую рост исследуемой культуры бактерий. Вначале готовят основной раствор, содержащий определенную концентрацию антибиотика (мкг/мл или ЕД/мл) в специальном растворителе или буферном растворе. Из него готовят все последующие разведения в бульоне (в объеме 1 мл), после чего к каждому разведению добавляют 0,1 мл исследуемой бактериальной суспензии, содержащей 106—107 бактериальных клеток в 1 мл. В последнюю пробирку вносят 1 мл бульона и 0,1 мл суспензии бактерий (контроль культуры). Посевы инкубируют при 37 °С до следующего дня, после чего отмечают результаты опыта по помутнению питательной среды, сравнивая с контролем культуры. Последняя пробирка с прозрачной питательной средой указывает на задержку роста исследуемой культуры бактерий, под влиянием содержащейся в ней минимальной ингибирующей концентрации (МИК) антибиотика.

Оценку результатов определения чувствительности микроорганизмов к антибиотикам проводят по специальной готовой таблице, которая содержит пограничные значения диаметров зон задержки роста для устойчивых, умеренно устойчивых и чувствительных штаммов, а также значения МИК антибиотиков для устойчивых и чувствительных штаммов.

К чувствительным относятся штаммы микроорганизмов, рост которых подавляется при концентрациях препарата, обнаруживаемых в сыворотке крови больного при использовании обычных доз антибиотиков. К умеренно устойчивым относятся штаммы, для подавления роста которых требуются концентрации, создающиеся в сыворотке крови при введении максимальных доз препарата.Устойчивыми являются микроорганизмы, рост которых не подавляется препаратом в концентрациях, создаваемых в организме при использовании максимально допустимых доз.

Определение антибиотика в крови, моче и других жидкостях организма человека. В штатив устанавливают два ряда пробирок. В одном из них готовят разведения эталонного антибиотика, в другом — исследуемой жидкости. Затем в каждую пробирку вносят взвесь тест-бактерий, приготовленную в среде Гисса с глюкозой. При определении в исследуемой жидкости пенициллина, тетрациклинов, эритромицина в качестве тест-бактерий используют стандартный штамм S. aureus, а при определении стрептомицина — Е. coli. После инкубирования посевов при 37 °С в течение 18—20 ч отмечают результаты опыта по помутнению среды и ее окрашиванию индикатором вследствие расщепления глюкозы тест-бактериями. Концентрация антибиотика определяется умножением наибольшего разведения исследуемой жидкости, задерживающей рост тест-бактерий, на минимальную концентрацию эталонного антибиотика, задерживающего рост тех же тест-бактерий. Например, если максимальное разведение исследуемой жидкости, задерживающее рост тест-бактерий, равно 1:1024, а минимальная концентрация эталонного антибиотика, задерживающего рост тех же тест-бактерий, 0,313 мкг/мл, то произведение 1024х0,313=320 мкг/мл составляет концентрацию антибиотика в 1 мл.

Определение способности S. aureus продуцировать бета-лактамазу. В колбу с 0,5 мл суточной бульонной культуры стандартного штамма стафилококка, чувствительного к пенициллину, вносят 20 мл расплавленного и охлажденного до 45 °С питательного агара, перемешивают и выливают в чашку Петри. После застывания агара в центр чашки на поверхность среды помещают диск, содержащий пенициллин. По радиусам диска петлей засевают исследуемые культуры. Посевы инкубируют при 37 °С до следующего дня, после чего отмечают результаты опыта. О способности исследуемых бактерий продуцировать бета-лактамазу судят по наличию роста стандартного штамма стафилококка вокруг той или другой исследуемой культуры (вокруг диска).



biofile.ru


Смотрите также